Enterobakteriyaların və bəzi vibrionların diferensial təyinində Voqes-Proskauer reaksiyası xüsusi yer tutur. Test bakteriyaların qlükozanı ferment edərək asetoin əmələ gətirmə qabiliyyətinə əsaslanır.
Tədqiqat prosesinin mahiyyəti
Mikrobiologiyada Voges-Proskauer reaksiyası tez-tez Yersinia ailəsində enterobakteriyalar (yalançı vərəm və enterokolit patogenləri daxil olmaqla), Escherichia coli və spor əmələ gətirən aerobları diferensasiya etmək üçün istifadə olunur. Nəticə müəyyən reagentlər əlavə edildikdə mühitin rənglənməsi ilə vizuallaşdırılır.
Bu test IMViC seriyasına aiddir (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate qıs altması) - diferensial təriflər daxil olmaqla eyniləşdirmə testləri qrupu:
- indol ilə, triptofanın indola parçalanmasına əsaslanır, Kovacs və ya Ehrlich reagentinin iştirakı ilə istifadə olunur;
- istifadəmetilrot və ya metil qırmızı, qlükoza metabolizması nəticəsində müəyyən bir pH təyin edir;
- Asetil-metilkarbinolun aşkarlanması üçün Voges-Proskauer reaksiyaları;
- mühitin qələviləşməsi nəticəsində rəng dəyişikliyi ilə sitratın istifadəsi.
Prosesin mahiyyəti oksigenin iştirakı ilə onların əmələ gətirdiyi asetoinin kaustik kalium ilə qarşılıqlı təsiri nəticəsində diaqnoz qoyulmuş bakteriyaların mövcudluğunun vizuallaşdırılmasıdır. Asetil-metilkarbinol parlaq qırmızı və ya çəhrayı birləşmə əmələ gətirən diasetil kimi oksidləşir. Kaustik kalium əlavə etməzdən əvvəl alfa-naftol əlavə etməklə testin həssaslığını artırın.
Test ayarı
Voqes-Proskauer reaksiyasının tərtibi mikroorqanizmlərin ilkin becərilməsini nəzərdə tutur. Klarkın differensial diaqnostik mühitinə təmiz kultura səpilir, onun variasiyası Klark bulyonudur (aqar-aqar əlavə edilmədən). Ya hazır mühit istifadə olunur, ya da müstəqil hazırlanır. Tərkibi daxildir:
- 5g pepton;
- 5q qlükoza;
- 5g iki əsaslı kalium fosfat;
- 1L distillat.
Tədqiqat zamanı kultura steril bakterioloji ilmə ilə maye mühitə vurulur. Miqdarı - 5 ml sınaq borusuna əlavə olaraq nəzarət. İnkubasiya iki gün ərzində 35-37 dərəcə temperaturda aparılır. Sonra, Voges-Proskauer reaksiyasının tədqiqi mərhələlərlə aparılır:
- 2, 5 ml bulyon kulturası steril boruya köçürülür.
- Altı damcı alfa-naftol (5% spirt məhlulu) əlavə edin.
- 40% əlavə edin0,1 ml miqdarında kaustik kalium məhlulu və ya iki damcı.
- Qarışdırmaq sınaq borusunu yumşaq silkələməklə həyata keçirilir.
- Təcrübənin başlamasından 15 dəqiqə sonra nəticəni qiymətləndirin.
Alternativ sınaq metodu, vaxtı 18 saata və ya bir günə qədər azaldılan gecəlik inkubasiyadır. Bu üsula əlavə olaraq, ekspress testdən də istifadə olunur: kultura 2 ml mühitə ilgək şəklində daxil edilir, təxminən dörd saat inkubasiya edilir, sonra reagentlər bərabər miqdarda 2-3 damcı ilə əlavə edilir, qarışdırılır və nəticə on dəqiqədən sonra qiymətləndirilir.
Nəzarət sətəlcəm törədicilərindən biridir Klebsiella pneumoniae - ştam atcc 13883.
Nəticənin qiymətləndirilməsi
Reagentlər əlavə edildikdən sonra tələb olunan vaxtdan sonra (5-dən 15 dəqiqəyə qədər) aydın müsbət reaksiya ilə albalı-qırmızı rəng, zəif müsbət reaksiya ilə qırmızı və çəhrayı rəng müşahidə edilməlidir. Mənfi nəticə olaraq heç bir dəyişiklik qeydə alınmayıb.
Bir məhlulda kaustik kaliumun həddindən artıq olması, mis rənginə boyanaraq müsbət reaksiyanın təqlidini verə bilər. Bu zaman sınaqdan keçirilmiş koloniyanın mənfi cavabı qeydə alınmalıdır. Həmçinin, misin boyanması qiymətləndirmənin reagentlərin tətbiqindən bir saat sonra verildiyi hallarda görünür.
Nəticəni qiymətləndirərkən nəzərə almaq lazımdır ki, öyrənilən mikroorqanizmlərin uzun müddət becərilməsi (üç gündən çox) mühitin turşulaşmasına gətirib çıxarır ki, bu da tədqiqatın yanlış nəticəsinə gətirib çıxara bilər. Reaksiya yüngül müsbət və ya ola biləryanlış mənfi.
Sınaq reagentləri üçün tələblər
Voges-Proskauer reagentləri düzgün konsentrasiya, yüksək saflıq və sabitlik kimi tələblərə cavab verməlidir ki, bu da düzgün saxlama ilə əldə edilir.
İstifadəyə hazır test dəstləri adətən 100 və ya daha çox istifadə üçün reagentlərdən ibarətdir və plastik və ya rəngli şüşə flakonlarda olur. Keyfiyyət müvafiq sənədlərlə tənzimlənir.
