Mikroskopik tədqiqat metodları xüsusi avadanlıqdan istifadə etməklə müxtəlif obyektlərin öyrənilməsi üsullarıdır. Bu, insan gözünün miqyası hüdudlarından kənarda olan maddələrin və orqanizmlərin quruluşunu nəzərdən keçirməyə imkan verir. Məqalədə mikroskopik tədqiqat üsullarını qısaca təhlil edəcəyik.
Ümumi məlumat
Mükroskopik müayinənin müasir üsullarından müxtəlif mütəxəssislər öz təcrübələrində istifadə edirlər. Onların arasında virusoloqlar, sitoloqlar, hematoloqlar, morfoloqlar və başqaları var. Mikroskopik müayinənin əsas üsulları çoxdan məlumdur. Əvvəla, bu, obyektlərə baxmaq üçün yüngül bir üsuldur. Son illərdə digər texnologiyalar fəal şəkildə praktikaya daxil edilmişdir. Beləliklə, tədqiqatın faza-kontrast, luminescent, interferensiya, qütbləşmə, infraqırmızı, ultrabənövşəyi, stereoskopik üsulları populyarlıq qazanmışdır. Onların hamısı müxtəlif xüsusiyyətlərə əsaslanır. Sveta. Bundan əlavə, elektron mikroskopik tədqiqat üsullarından geniş istifadə olunur. Bu üsullar yüklü hissəciklərin yönəldilmiş axınından istifadə edərək obyektləri göstərməyə imkan verir. Qeyd etmək lazımdır ki, bu cür tədqiqat üsulları təkcə biologiya və tibbdə istifadə edilmir. Sənayedə metalların və ərintilərin öyrənilməsinin mikroskopik üsulu olduqca populyardır. Belə bir araşdırma oynaqların davranışını qiymətləndirməyə, nasazlıq ehtimalını minimuma endirmək və gücü artırmaq üçün texnologiyalar hazırlamağa imkan verir.
Yüngül yollar: xüsusiyyətlər
Mikroorqanizmlərin və digər obyektlərin öyrənilməsi üçün belə mikroskopik üsullar avadanlığın müxtəlif rezolyusiyalarına əsaslanır. Bu vəziyyətdə vacib amillər şüanın istiqaməti, obyektin özünün xüsusiyyətləridir. Sonuncu, xüsusən də şəffaf və ya qeyri-şəffaf ola bilər. Obyektin xüsusiyyətlərinə uyğun olaraq, işıq axınının fiziki xassələri dəyişir - parlaqlıq və rəng, amplituda və dalğa uzunluğuna, müstəviyə, fazaya və dalğanın yayılma istiqamətinə görə. Müxtəlif mikroskopik tədqiqat üsulları bu xüsusiyyətlərin istifadəsinə əsaslanır.
Spesifiklər
İşıq üsulları ilə öyrənmək üçün obyektlər adətən rənglənir. Bu, onların müəyyən xüsusiyyətlərini müəyyən etməyə və təsvir etməyə imkan verir. Bu, toxumaların sabitlənməsini tələb edir, çünki boyanma yalnız öldürülmüş hüceyrələrdə müəyyən strukturları aşkar edəcəkdir. Canlı hüceyrələrdə boya sitoplazmada vakuol şəklində təcrid olunur. Quruluşları rəngləmir. Amma işıq mikroskopunun köməyi ilə canlı cisimləri də araşdırmaq olar. Bunun üçün həyati bir öyrənmə metodundan istifadə olunur. Belə hallarda qaranlıq sahə kondensatoru istifadə olunur. O, işıq mikroskopuna quraşdırılmışdır.
Boyanmamış obyektləri öyrənmək
Faza-kontrast mikroskopiyadan istifadə etməklə aparılır. Bu üsul obyektin xüsusiyyətlərinə uyğun olaraq şüanın difraksiyasına əsaslanır. Ekspozisiya prosesində faza və dalğa uzunluğunda dəyişiklik qeyd olunur. Mikroskopun obyektivində şəffaf bir lövhə var. Canlı və ya sabit, lakin rəngli olmayan obyektlər, şəffaflığına görə, demək olar ki, onlardan keçən şüanın rəngini və amplitüdünü dəyişmir, yalnız dalğa fazasında sürüşməyə səbəb olur. Ancaq eyni zamanda, obyektdən keçərək, işıq axını boşqabdan kənara çıxır. Nəticədə obyektdən keçən və işıq fonuna daxil olan şüalar arasında dalğa uzunluğunda fərq yaranır. Müəyyən bir dəyərdə vizual effekt yaranır - qaranlıq bir obyekt açıq fonda və ya əksinə (faza plitəsinin xüsusiyyətlərinə uyğun olaraq) aydın görünəcəkdir. Onu əldə etmək üçün fərq dalğa uzunluğunun ən azı 1/4 hissəsi olmalıdır.
Anoptral metod
Bu, bir növ faza-kontrast üsuludur. Anoptral üsul, yalnız fon işığının rəngini və parlaqlığını dəyişən xüsusi lövhələri olan bir lensin istifadəsini nəzərdə tutur. Bu, boyanmamış canlı obyektlərin tədqiqi imkanlarını əhəmiyyətli dərəcədə genişləndirir. Faza-kontrast mikroskopik tədqiqat metodu mikrobiologiyada, parazitologiyada bitki və heyvan hüceyrələrinin öyrənilməsində,ən sadə orqanizmlər. Hematologiyada bu üsul qan və sümük iliyi elementlərinin diferensiasiyasını hesablamaq və müəyyən etmək üçün istifadə olunur.
Müdaxilə üsulları
Bu mikroskopik tədqiqat metodları ümumiyyətlə faza-kontrastla eyni problemləri həll edir. Lakin sonuncu halda mütəxəssislər yalnız obyektlərin konturlarını müşahidə edə bilərlər. Müdaxilə mikroskopik tədqiqat üsulları onların hissələrini öyrənməyə, elementlərin kəmiyyət qiymətləndirilməsini həyata keçirməyə imkan verir. Bu, işıq şüasının bifurkasiyası sayəsində mümkündür. Bir axın cismin zərrəciyindən, digəri isə onun yanından keçir. Mikroskopun göz qapağında onlar birləşir və müdaxilə edirlər. Yaranan faza fərqi müxtəlif hüceyrə strukturlarının kütləsi ilə müəyyən edilə bilər. Onu ardıcıl olaraq verilmiş sındırma göstəriciləri ilə ölçməklə sabit olmayan toxumaların və canlı cisimlərin qalınlığını, onlarda zülalın miqdarını, quru maddənin və suyun konsentrasiyasını və s. müəyyən etmək mümkündür. Alınan məlumatlara uyğun olaraq mütəxəssislər dolayı yolla membran keçiriciliyini, ferment aktivliyini və hüceyrə metabolizmini qiymətləndirə bilir.
Polarizasiya
Nikol prizmalarından və ya plyonkalı polaroidlərdən istifadə etməklə həyata keçirilir. Onlar dərman və işıq mənbəyi arasında yerləşdirilir. Mikrobiologiyada qütbləşmə mikroskopik tədqiqat metodu qeyri-homogen xassələri olan obyektləri tədqiq etməyə imkan verir. İzotropik strukturlarda işığın yayılma sürəti seçilmiş müstəvidən asılı deyil. Bu halda anizotrop sistemlərdə sürət uyğun olaraq dəyişirobyektin eninə və ya uzununa oxu boyunca işığın istiqamətləndirilməsi. Quruluş boyunca qırılmanın böyüklüyü eninə olandan böyükdürsə, ikiqat müsbət refraksiya yaranır. Bu, ciddi molekulyar oriyentasiyaya malik olan bir çox bioloji obyektlər üçün xarakterikdir. Onların hamısı anizotropdur. Bu kateqoriyaya, xüsusən də miofibrillər, neyrofibrillər, kirpikli epiteldəki kirpiklər, kollagen liflər və başqaları daxildir.
Polarizasiya dəyəri
Şüaların sınma təbiətinin və cismin anizotropiya göstəricisinin müqayisəsi strukturun molekulyar təşkilini qiymətləndirməyə imkan verir. Qütbləşmə metodu analizin histoloji üsullarından biri kimi çıxış edir, sitologiyada istifadə olunur və s. İşıqda təkcə rəngli obyektləri öyrənmək olmaz. Qütbləşmə metodu toxuma kəsiklərinin ləkələnməmiş və sabitlənməmiş yerli preparatlarını öyrənməyə imkan verir.
Luminescent fəndləri
Onlar spektrin mavi-bənövşəyi hissəsində və ya UV şüalarında parıltı vermək üçün bəzi obyektlərin xüsusiyyətlərinə əsaslanır. Bir çox maddələr, məsələn, zülallar, bəzi vitaminlər, kofermentlər, dərmanlar, ilkin (daxili) lüminessensiya ilə təchiz edilmişdir. Flüoroxromlar, xüsusi boyalar əlavə edildikdə digər obyektlər parlamağa başlayır. Bu əlavələr selektiv və ya diffuz şəkildə ayrı-ayrı hüceyrə strukturlarına və ya kimyəvi birləşmələrə yayılır. Bu xüsusiyyət histokimyəvi və luminesans mikroskopiyasının istifadəsi üçün əsas təşkil etmişdirsitoloji tədqiqatlar.
İstifadə sahələri
İmmuno-flüoressensiyadan istifadə etməklə mütəxəssislər viral antigenləri aşkarlayır və onların konsentrasiyasını təyin edir, virusları, anticisimləri və antigenləri, hormonları, müxtəlif metabolik məhsulları və s. Bu baxımdan, herpes, parotit, viral hepatit, qrip və digər infeksiyaların diaqnozunda materialların müayinəsi üçün luminescent üsullardan istifadə olunur. Mikroskopik immunofluoressensiya üsulu bədxassəli şişləri tanımağa, infarktın ilkin mərhələlərində ürəyin işemik sahələrini təyin etməyə və s. imkan verir.
Ultrabənövşəyi işıqdan istifadə
O, canlı hüceyrələrə, mikroorqanizmlərə və ya sabit, lakin rəngsiz, görünən-işıq-şəffaf toxumalara daxil olan bir sıra maddələrin müəyyən dalğa uzunluğunun UV şüalarını udmaq qabiliyyətinə əsaslanır. Bu, xüsusilə makromolekulyar birləşmələr üçün xarakterikdir. Bunlara zülallar, aromatik turşular (metilalanin, triptofan, tirozin və s.), nuklein turşuları, piramidal və purin əsasları və s. Ultraviyole mikroskopiya bu birləşmələrin lokalizasiyasını və miqdarını aydınlaşdırmağa imkan verir. Mütəxəssislər canlı obyektləri tədqiq edərkən onların həyat proseslərindəki dəyişiklikləri müşahidə edə bilərlər.
Əlavə
İnfraqırmızı mikroskopiya işığa və UV şüalarına qeyri-şəffaf olan obyektləri udaraq öyrənmək üçün istifadə olunur.dalğa uzunluğu 750-1200 nm olan axın strukturları. Bu üsulu tətbiq etmək üçün hazırlıqları ilkin olaraq kimyəvi müalicəyə məruz qoymağa ehtiyac yoxdur. Bir qayda olaraq, infraqırmızı üsul antropologiya, zoologiya və digər bioloji sahələrdə istifadə olunur. Təbabətə gəlincə, bu üsul əsasən oftalmologiya və neyromorfologiyada istifadə olunur. Həcmli obyektlərin tədqiqi stereoskopik mikroskopiyadan istifadə etməklə həyata keçirilir. Avadanlığın dizaynı müxtəlif bucaqlarda sol və sağ gözlərlə müşahidə aparmağa imkan verir. Qeyri-şəffaf obyektlər nisbətən aşağı böyüdücü (120 dəfədən çox olmayan) ilə yoxlanılır. Stereoskopik üsullar mikrocərrahiyyə, patomorfologiya və məhkəmə tibbdə istifadə olunur.
Elektron mikroskopiya
Makromolekulyar və hüceyrə altı səviyyələrdə hüceyrələrin və toxumaların quruluşunu öyrənmək üçün istifadə olunur. Elektron mikroskopiya tədqiqat sahəsində keyfiyyətcə sıçrayış etməyə imkan verdi. Bu üsuldan biokimya, onkologiya, virusologiya, morfologiya, immunologiya, genetika və digər sənaye sahələrində geniş istifadə olunur. Avadanlığın ayırdetmə qabiliyyətinin əhəmiyyətli dərəcədə artması elektromaqnit sahələrindən vakuumda keçən elektronların axını ilə təmin edilir. Sonuncular, öz növbəsində, xüsusi linzalar tərəfindən yaradılmışdır. Elektronlar cismin strukturlarından keçmək və ya müxtəlif bucaqlarda sapmalarla onlardan əks olunmaq qabiliyyətinə malikdirlər. Nəticədə alətin luminescent ekranında displey yaradılır. Transmissiya mikroskopiyası ilə müstəvi təsvir, müvafiq olaraq, həcmli skanla əldə edilir.
Lazımi şərtlər
Qeyd etmək lazımdır ki, elektron mikroskopik müayinədən keçməzdən əvvəl obyekt xüsusi hazırlıqdan keçir. Xüsusilə, toxumaların və orqanizmlərin fiziki və ya kimyəvi fiksasiyası istifadə olunur. Bölmə və biopsiya materialı, əlavə olaraq, susuzlaşdırılır, epoksi qatranlarına daxil edilir, almaz və ya şüşə bıçaqlarla ultra nazik hissələrə kəsilir. Sonra onlar təzad edilir və öyrənilir. Taranan mikroskopda obyektlərin səthi tədqiq edilir. Bunun üçün onlara vakuum kamerasında xüsusi maddələr səpilir.
