Bakterial infeksiyaların müxtəlifliyi patogenin dəqiq müəyyən edilməsini və onun növlərinin müəyyən edilməsini tələb edir. Mikroorqanizmin növünü müəyyən etmək üçün mikrobioloqlara onun tinktorial xüsusiyyətləri - mikrobun müxtəlif boyalarla boyanmağa həssaslığı kömək edir. Bu üsul patogenin morfologiyasını tədqiq etməyə imkan verir. Bakteriyaların tinktorial xüsusiyyətləri mikrobiologiya sahəsində praktiki və nəzəri tədqiqatlar üçün böyük əhəmiyyət kəsb edir.
Mikrob tədqiqatı
Bakteriologiyada mikroorqanizmlərin rənglənməsi üçün bir çox üsullar mövcuddur. Onların hamısı bakteriyaların tinktorial xüsusiyyətlərinə əsaslanır. Boyanma onların formasını, quruluşunu, ölçüsünü, nisbi mövqeyini müəyyən etməyə imkan verir. Bu, ümumi biologiya və müqayisəli mikrobiologiyanın mikroorqanizmlərin növlərinin sistemləşdirilməsi problemlərini həll etməyə imkan verir.
Niyə onları rəngləyin
Bakteriyalar praktiki olaraq varşəffaf orqanizmlər və boyanmadan istifadə etmədən adi mikroskopiya üçün zəif görünürlər. Obyektləri öyrənmək üçün xüsusi növ mikroskopiyadan (faza kontrastı, qaranlıq sahə) istifadə edə bilərsiniz, lakin ən asan yol ləkələməkdir, bundan sonra bakteriyalar adi işıq mikroskopunda görünür.
Nümunə hazırlığı
İstifadə olunan rəngləmə texnikasından asılı olmayaraq, tədqiq olunan obyektin hazırlanması üçün vahid qaydalar mövcuddur. Aşağıdakı mərhələlər məcburidir:
- Steril alətlər şüşə slaydda ləkə yaradır.
- Nümunə qurudulur. Bu, otaq temperaturunda və ya qurutma şkaflarından istifadə etməklə edilir.
- Fiksasiya mərhələsinin ardınca - mikroorqanizmlər xüsusi birləşmələrlə şüşəyə yapışdırılır.
- Düzgün boyanma - nümunə müəyyən müddət ərzində boya ilə örtülür, bundan sonra yuyulur.
- Son qurutma - nümunə yenidən qurudulur.
Ən çox yayılmış boyalar
Ən çox istifadə edilən boyalar müxtəlif turşu dəyərləri (pH) olan aniline əsaslanır. Əksər boyalar spirtdə seyreltilmiş tozlardır.
Kationların rəngləndirici maddələr olduğu boyalar əsas adlanır (pH 7-dən çox). Onlar mikroorqanizmləri qırmızı (magenta, safranin), bənövşəyi (metil bənövşəyi, tionin), mavi (metilen mavisi), yaşıl (malakit yaşıl), qəhvəyi (xrizoidin) və qara (indulin) rənglərdə ləkələmək üçün istifadə edilə bilər.
Rəngləndirici maddələrin anion olduğu boyalar turşu adlanır (pH 7-dən az). Onlar nümunəni qırmızı (eozin), sarı (pikrin) və ya qara (niqrozin) rəngə boyayacaqlar.
Neytral boyalar qrupu (məsələn, rodamin B) var ki, burada həm kationlar, həm də anionlar rəngləmə agenti kimi çıxış edir.
Mədəniyyət ölü və ya diri
Sınaq nümunəsinin həyat formasına görə rəngləmə üsulları iki qrupa bölünür.
- Vital (ömür boyu) boyama. Mikroorqanizmlərin xassələrinin öyrənilməsinin bu üsulu canlı toxumaların öyrənilməsində istifadə olunur ki, bu da mikrobların həyati proseslərini müşahidə etməyə imkan verir. Bu rəngləmə üçün aşağı toksiklik və yüksək nüfuzetmə gücü olan boyalar istifadə olunur.
- Post-vital boyama. Bu, ölü və ya öldürülmüş mikroorqanizmlərin boyanmasıdır. Bakteriyaların tinktorial xüsusiyyətləri sayəsində mikrobioloqlar onların quruluşunu müəyyən edirlər. Məhz bu rəngləmə ən çox istifadə olunur.
Qram-müsbət və qram-mənfi
Məhz bakteriyaların bu xüsusiyyətləri müxtəlif dərmanların təlimatlarında tapıla bilər. Bakteriyaların tinktorial xüsusiyyətlərinin öyrənilməsinin bu üsulu gentian bənövşəyi boya və yod fiksasiyasının istifadəsinə əsaslanır. Bu texnikanı 1884-cü ildə təklif edən danimarkalı həkim Hans Kristian Qramdır. Bu boyanma nəticəsində bakteriyalar iki qrupa bölünür:
- Qram (+) - mavi rəngə çevirin(stafilokoklar və streptokoklar).
- Qram (-) - çəhrayıdan qırmızıya qədər ləkə (enterobakteriyalar, salmonellalar, E. coli).
Müxtəlif boyanma nəticələri bakterial divarların fərqli tinktorial xüsusiyyətlərinə görədir. Qram boyama üsulu bəzi yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikasında hələ də əsas üsuldur.
Digər rəngləmə üsulları
Bakteriologiyada geniş istifadə olunan daha bir neçə metodu xarakterizə edək.
- Ziehl-Nelson üsulu - bakteriyaların turşuya davamlılığını təyin edir. O, vərəm və mikobakteriozun törədicilərini müəyyən edir.
- Romanovski-Giemsa texnikası - asidofil (sirkə turşusu və laktik turşu) bakteriyalarını qırmızı, bazofil (spiroxetlər və protozoa) isə mavi rəngə boyayır.
- Morozov texnikası - bakteriyaları qəhvəyi rəngə boyayır və onların flagellalarını görünən edir.
Sporlar görünə bilər
Tsielin fuşsinlə boyanması bakteriya sporlarını görməyə imkan verir. Ləkədən sonra çəhrayı rəngə sahib olmaqla, mavi bakteriyaların fonunda aydın görünürlər. Bu üsul həm də bakteriologiyanın alətidir və böyük praktik əhəmiyyətə malikdir.
