Qram ləkəsi mikrobiologiyada geniş istifadə olunur, çünki bu bakteriyaları hüceyrə divarının tərkibinə görə fərqləndirməyin ən asan yollarından biridir. Qram görə, bütün bakteriyalar qram-müsbət (Qram (+)) və qram-mənfi (Qram (-)) bölünə bilər. Qram boyama üsulu 1884-cü ildə hazırlanıb və bir neçə dəfə dəyişdirilsə də, o vaxtdan bəri populyarlığını itirməyib.
Hüceyrə divarının quruluşu
Qram boyama bakteriyanın qram-müsbət və ya qram-mənfi olduğunu aşkar edir. Bakteriyaların Qram (+) və Qram (-) bölünməsi onların hüceyrə divarının quruluşuna uyğun olaraq həyata keçirilir.
Hüceyrə divarında ən çox peptidoqlikan (murein) var - mürəkkəb maddə, peptapeptid və qlikan. Qlikan bir-biri ilə β-1 ilə əlaqəli N-asetilqlükozamin və N-asetilmuramik turşunun alternativ qalıqlarından ibarətdir,4-qlikozid bağları. Peptidoqlikan hüceyrə formasının saxlanması, osmotik qorunma və antigen funksiyaları təmin edir.
Qram-müsbət və qram-mənfi bakteriyalar arasında əsas fərqlər
Müxtəlif bakteriyaların fərqli peptidoqlikan təbəqəsi qalınlığı var. Qram-müsbət olaraq təsnif edilən bakteriyalarda 15-80 nm, qram-mənfilərdə isə 2-8 nm arasında dəyişir. Eyni zamanda, qram-mənfi bakteriyalar peptidoqlikan təbəqəsinin altında xüsusi bir quruluşa malikdir, qram-müsbət bakteriyalarda yoxdur - periplazmatik boşluq. Bu boşluq hidrolitik fermentlər - β-laktamaza, ribonukleaza 1, fosfataza ilə doldurulur. Məhz bu fermentlər qram-mənfi bakteriyaların bir çox antibiotiklərə qarşı müqavimətindən məsuldur.
Bakteriyaların Qram(-) peptidoqlikan təbəqəsi tərkibində endotoksin olan antigenik struktur olan lipopolisaxaridlə bağlıdır. Gram(+) bakteriyalarda teyxoik turşular oxşar funksiyaları yerinə yetirir.
Qram-mənfi bakteriyalar əlavə bir quruluşa malikdir - xarici membran.
Boyama metodunun mahiyyəti
Boyanmağa başlamazdan əvvəl tədqiq edilmiş bakteriyaların yaxması hazırlanır. Bunun üçün bir şüşə slaydın üzərinə su damcılır və orada bakterial döngə ilə mikroorqanizmlərin mədəniyyəti əlavə edilir. Sonra, su tamamilə qurudulduqdan sonra, smear düzəldilir - şüşə sürüşmə brülörün alovu üzərində bir neçə dəfə aparılır. Qram boyama canlı bakteriyaların rənglənməsindən daha effektivdir - boya molekulları ölü hüceyrələrə daha yaxşı bağlanır.
Boyama bir neçə mərhələdə aparılır:
- Kiçik süzgəc kağızları sabit yaxma üzərinə qoyulur və əsas boya tökülür - gentian bənövşəyi və ya metilen mavisi.
- 3-5 dəqiqədən sonra rəngli süzgəc kağızını çıxarın və ləkəni Luqol məhlulu ilə 1 dəqiqə doldurun. Bu halda hazırlıq qaralır.
- Lugol məhlulu süzülür və yaxma təmiz etil spirti ilə işlənir: preparatın üzərinə bir neçə damcı damcılır, 20 saniyədən sonra süzülür. Prosedur 2-3 dəfə təkrarlanır.
- Test slaydını distillə edilmiş su ilə yuyun.
- Əlavə ləkə əmələ gətirin - hazırlığı fuksinlə bitirin. 1-2 dəqiqədən sonra boya yuyulur.
- Su quruduqdan sonra yaxmanı mikroskop altında yoxlayın. Qram-müsbət bakteriyalar mavi-bənövşəyi, qram-mənfi bakteriyalar çəhrayı və ya qırmızı rəngdə olacaq.
Müxtəlif ləkə nümunələrinin səbəbləri
Yuxarıda təsvir olunduğu kimi, bakteriyaların qramla boyanması Qram-müsbət bakteriyaları mavi-bənövşəyi, qram-mənfi bakteriyalar isə qırmızı və ya çəhrayı rəngə boyayır. Bakteriyaların bu üsulla differensial boyanmasının səbəbi ondan ibarətdir ki, bənövşənin həll olunan forması hüceyrəyə daxil olduqdan sonra boya həll olunmayan yod formasına keçir. Bakteriyaların etil spirti ilə müalicəsi zamanı bu qeyri-polyar həlledicinin təsiri altında lipidlər membrandan çıxarılır. Bundan sonra membran məsaməli olur və artıq boyanın yuyulması üçün əhəmiyyətli bir maneə deyil. Lakinpeptidoqlikan qeyri-qütblü həlledicilərə, o cümlədən spirtə daha davamlıdır. Boyanın yuyulmasının qarşısını alan odur, buna görə də qalın murein təbəqəsi olan bakteriyalar mavi-bənövşəyi rəngə (qram-müsbət) çevrilir və spirtlə müalicə edildikdən sonra rəngləri dəyişmir.
Qram-mənfi bakteriyaların nazik murein təbəqəsi hüceyrədə boya molekullarını saxlaya bilmir, ona görə də spirtin təsirindən sonra onlar rəngsiz olur - qram-mənfi ləkələnir.
Yaxmanın fuksinə məruz qalmasından sonra Qram ilə boyanmış bakteriyalar mavi-bənövşəyi qalır, qram-mənfi bakteriyalar isə çəhrayı-qırmızı olur.
Qram(+) və Qram(-) bakteriya nümunələri
Qram-mənfi bakteriyalara siyanobakteriyalar, kükürd bakteriyaları, dəmir bakteriyaları, xlamidiya, rikketsiya, sirkə bakteriyaları, bir çox metilobakteriyalar, tionik bakteriyalar, arsenitobakteriyalar, karboksibakteriyalar daxildir.
Bfidobakteriyalar, bir çox su bakteriyaları, streptokoklar və stafilokoklar qram-müsbətdir.
